Résolution des sous-unités de la thrombine comme l'enzyme Agapurine du venin d'Agkistrodon halys et séquençage des résidus d'acides aminés

[Résumé] Objectif Déterminer les 15 résidus d'acides aminés N-terminaux de deux sous-unités similaires d'agacutine.Les deux sous-unités de la molécule d'enzyme doivent être scindées pour obtenir la chaîne peptidique unique de la sous-unité et séquencées.Méthodes L'agacutine hautement purifiée a été obtenue par une méthode biochimique.Des échantillons de sous-unités uniques pour l'identification et le séquençage ont été préparés par séparation par électrophorèse SDS-PAGE, récupération de bande adhésive de sous-unité et technologie d'électrotransfert de membrane PVDF.Ce dernier a déterminé 15 résidus d'acides aminés à l'extrémité N-terminale de la sous-unité par la méthode de dégradation d'Edman.Résultats La séquence de la grande sous-unité (16 kDa) était DCSSGWSSYEEHQYY, et celle de la petite sous-unité (15 kDa) était DSSGWSSYEGHEYYV.Conclusion Les résultats du séquençage ont montré qu'Agacutin était une nouvelle enzyme semblable à la thrombine de venin de serpent en recherchant dans la base de données NCBI.